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與香豆素和花菁相比,羅丹明通常更耐光并且對(duì)PH值不敏感。被廣泛使用的羅丹明胺包括羅丹明110、四甲基羅丹明(例如TAMRA或TRITC)和X-羅丹明(例如TexasRed)。羅丹明綴合物必須仔細(xì)制備,因?yàn)楫?dāng)多于兩個(gè)或三個(gè)染料分子共價(jià)附于靶分子(例如抗體分子)時(shí),它們特別容易淬滅。
常見羅丹明染料光譜性質(zhì)
表一 四甲基羅丹明(TRITC)光譜性質(zhì)
激發(fā)波長(zhǎng)(nm) |
488/532nm激發(fā) |
濾波片組 |
TRITC |
Ex(nm) |
552 |
Em(nm) |
578 |
消光系數(shù) |
85000 |
熒光量子產(chǎn)率 |
0.1 |
圖1.四甲基羅丹明(TEITC)的激發(fā)和發(fā)射光譜
羅丹明反應(yīng)性染料
反應(yīng)性熒光羅丹明和羅丹明衍生物廣泛用于共價(jià)標(biāo)記生物分子,例如抗體、碳水化合物、核酸、蛋白質(zhì)、肽和寡核苷酸。羅丹明共軛物可產(chǎn)生明亮且穩(wěn)定的橙色熒光,常與藍(lán)色、綠色或遠(yuǎn)紅外色熒光探針組合使用,用作檢測(cè)酶活性或在多重?zé)晒庋芯恐刑峁?duì)比的底物。特定的羅丹明和羅丹明衍生物很容易與染料的各種基團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)。
表二 可用于標(biāo)記生物分子的反應(yīng)性羅丹明和羅丹明衍生物
品名 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
化學(xué)反應(yīng)性 |
反應(yīng)基團(tuán) |
5-羧基羅丹明110 |
322 |
5mg |
碳二亞胺預(yù)活化后的胺 |
羧基 |
6-羧基羅丹明110 |
323 |
5mg |
碳二亞胺預(yù)活化后的胺 |
羧基 |
5(6)-羧基四甲基羅丹明乙二胺 |
354 |
25mg |
醛、羧酸、酮 |
乙二胺 |
5-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯 |
373 |
5mg |
胺 |
琥珀酰亞胺酯 |
6-ROX 6-羧基-X-羅丹明 |
382 |
25mg |
胺 |
琥珀酰亞胺酯 |
Texas Red-X,琥珀酰亞胺酯 |
474 |
5mg |
胺 |
琥珀酰亞胺酯 |
表三 羅丹明標(biāo)記的熒光綴合物
品名 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
生物功能 |
Ex/Em(nm) |
鬼筆環(huán)肽-羅丹明標(biāo)記 |
23102 |
300Tests |
標(biāo)記肌動(dòng)蛋白微絲 |
552/578 |
AnnexinV TRITC標(biāo)記 |
20031 |
100Tests |
檢測(cè)細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸(ps) |
544/570 |
TRITC-葡聚糖偶聯(lián)物 |
21706 |
25mg |
心血管,微循環(huán),灌注,細(xì)胞膜通量示蹤劑 |
544/570 |
TexasRed-鏈霉親和素偶聯(lián)物 |
16911 |
1mg |
心血管,微循環(huán),灌注,細(xì)胞膜通量示蹤劑 |
586/603 |
TexasRed山羊抗小鼠lgG(H+L) |
16853 |
1mg |
間接檢測(cè)小鼠一抗 |
586/603 |
表四 其他羅丹明指示劑
品名 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
生物功能 |
Ex/Em(nm) |
羅丹明123 |
22210 |
25mg |
活細(xì)胞線粒體指示劑 |
508/528 |
二氫羅丹明123 |
15206 |
10mg |
過氧化氫指示劑 |
508/528 |
羅丹明B |
22211 |
10mg |
活細(xì)胞線粒體指示劑 |
546/568 |
四甲基羅丹明甲酯TMRM |
22221 |
25mg |
線粒體膜電位指示劑 |
552/574 |
TRITC-DHPE |
23301 |
1mg |
磷脂示蹤劑 |
544/570 |